有机抗菌材料抗菌检测琼脂扩散法技术原理及方法介绍

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有机抗菌材料抗菌检测琼脂扩散法技术原理及方法介绍

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2024-09-26
来源：中科检测

琼脂扩散法属于定性测定方法，是利用抗菌材料在琼脂内向四周自由扩散，使其浓度随扩散距离增大而降低，在一定的扩散距离内，细菌生长受到抑制而形成抑菌圈，根据抑菌圈大小定性地判定细菌对药物的敏感性。主要包括K-B法、杯碟法和孔穴扩散法以及挖沟法。

作为第三方检测中心，中科检测机构拥有CMA和CNAS认证检测资质，检测设备齐全，数据科学可靠，可出具国家认可的有机抗菌材料抗菌检测报告。

抗菌检测：K-B法

K-B法即纸片琼脂扩散法，将含有抗菌材料的圆纸片放在均匀地接种了试验菌株的琼脂平板上，抗菌样品吸取琼脂中的水分不断向纸片周围区域扩散形成递减的梯度浓度。纸片周围抑菌浓度范围内菌株的生长被抑制，形成透明的抑菌圈，抑菌圈的大小与抗菌材料的抗菌效力有直接关系。滤纸片分湿、干2种，可以在试验时用6mm的无菌纸片沾取药物溶液制成湿纸片，也可以预先做成一定浓度的干燥纸片。一般来说预先制成的干燥纸片较为实用且更加准确。

结果评价：量取各纸片抑菌直径大小，并仔细观察抑菌圈的清晰度，通常直径小于10mm的判为该抗菌药物为低度敏感，10～15mm之间为中度敏感，15～25mm为高度敏感，25mm以上为极度敏感。具体对于不同的菌株以及不同的有机抗菌材料纸片，应需参照NCCLs标准或者CLSI标准。

K-B法能直接体现出抗菌材料的抗菌效力，其优点是：此法简便、经济，直观明显，对比鲜明，有一定的试验依据，有利于批量样品的处理。缺点是：以K-B法测定抗菌活性时，若有机抗菌样品具有较大的分子结构或者与琼脂有较大相互作用力，那么抗菌样品在琼脂内的扩散将非常缓慢。对于某些快速或蔓延生长的微生物作为抗菌活性测定时，常在抑菌圈内生成较薄的菌苔使抑菌圈现象不明显（即“卫星现象”）或不显示抑菌环，从而对样品的抗菌活性判断错误，同时测试结果还受到多种因素的影响，如培养基的pH、琼脂的含量、接菌量、孵育温度和时间。

抗菌检测：杯碟法

用灭菌棉拭子将待测悬菌液致密均匀地涂布于平皿培养基表面，然后将灭菌牛津杯放置在培养基上，轻轻加压，使其与培养基接触无空隙。每个平板可放置4～6个牛津杯。分别向各个杯中滴加有机抗菌样品，勿使其外溢。置37℃培养箱内孵育8～18h，观察抑菌圈大小。杯碟法操作需非常小心，否则易造成牛津杯在琼脂平板表面滑动，抗菌材料向菌层中渗透，扩散不均匀，得到的抑菌圈不规则。其优点是，成本低廉，重复性和准确性好，而且由于杯碟法加药量相对比较多，特别适合中药的体外抗菌试验。需要注意的是在杯碟法中，试验菌株的浓度对抗菌效力的影响很大。